产品目录

本制品是我公司开发的专门用于白色链珠菌总RNA快速提取的试剂盒，以帮助科研用户解决提取白色链珠菌RNA困难的问题，得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。

白色念珠菌（Candida albicans），是一种真菌，通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式（芽生菌丝相）侵入细胞引起疾病。因此对其进行分子生物学研究具有重要意义。

• 操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟（对一个样品而言）。
  
• RNA纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
  
• 一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
  
• RNA产率高，一般在20～70μg/mL白色念珠菌培养物。
  
• 可以进行无氯仿操作，只是纯度稍微降低，但不影响使用。

• 将50mg左右湿重的样品(或100mg左右的菌落)转移到1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1～10mL液体真菌在1.5mL塑料离心管中15000g离心1分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
  
• 将真菌沉淀在液氮中冷凝成固体，再转移到一个干净的研钵中，在液氮中研磨成粉。再把粉转移到到离心管中。最后加入65℃预热的0.4mL白色念球菌RNA纯化溶液A。
  
• 也可以采用球磨破碎仪或超声破碎仪在0.4mL白色念球菌RNA纯化溶液A中破碎细胞。
  
• 加入0.4mL白色念球菌RNA纯化溶液B，剧烈振荡30秒。
  
• 65℃保温5分钟。
  
• 室温15000g离心3分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
  
• 再加入0.1mL白色念球菌RNA纯化溶液B和0.1mL自备氯仿。
  
  • 此步可以不加氯仿，但纯度稍低。
• 涡旋振荡混匀30秒。
  
• 室温15000g离心3分钟，转移上清到一自备的、干净的5mL塑料离心管中。
  • 1.5mL的离心管装不了后续要加的溶液。
• 加入1.5mL的白色念球菌RNA纯化溶液C（约1.2～1.5mL）和0.5mL的白色念球菌RNA纯化溶液D，充分颠倒混匀。
  
• 将0.7mL混合液转移到离心吸附柱中，15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。重复此操作直到将所有混合液挂柱。
  
• 加入0.5mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
  
• 重复上步洗涤一次。
  
• 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
  
• 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30～100μL RNA洗脱液。
  
• 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。